經(jīng)驗總結(jié)一：液質(zhì)使用經(jīng)驗與禁忌

 

1、酸性物質(zhì)適合做負離子檢測，所以流動相偏堿性較合適，促使其解離，堿性物質(zhì)適合做正離子檢測，流動相中適當?shù)募尤胨?，促使其形成正離子，流動相中適當加一些醋酸鈉（或者醋酸銨），可形成加鈉的正離子或者加銨的正離子。

 

 

液質(zhì)分析中推薦使用的流動相和添加劑

 

 

2、糖苷類的物質(zhì)在做FAB和esi（＋）時，[M+Na]峰往往比[M+H]峰要強，此為經(jīng)驗，原因只是推測可能和天然產(chǎn)物的提取過程有關(guān)；鹽類化合物如鹽酸鹽、硫酸鹽在質(zhì)譜中酸的部分一般不會出現(xiàn)；二羧酸鹽（esi負離子模式）除了分子離子峰外，會出現(xiàn)連續(xù)掉44的兩個峰，為失去羧酸根的離子，這三個峰非常特征，但是會受錐孔電壓的影響，調(diào)低電壓譜圖會更漂亮。

 

3、胺類物質(zhì)做esi質(zhì)譜時要注意進樣量要少，因為很容易離子化，不易沖洗干凈，會影響后面樣品的測定。像三乙胺在液質(zhì)聯(lián)用時不能用于調(diào)節(jié)流動相pH值。若不慎引入三乙胺，在正離子檢測時總會出現(xiàn)很強的102峰（三乙胺的[M+H]）.

 

4、質(zhì)譜用水一般用娃哈哈純凈水之類的就很好；質(zhì)譜用甲醇和乙腈，換用了很多品牌，發(fā)現(xiàn)Merck的還是稍微好一些；Finnigan用的氮氣不一定要用到液氮瓶，用普通的鋼瓶氣就可以了，可能還省錢些；建議大家買一個好一點的手電筒和一個放大鏡，手電筒用來看源里面，放大鏡看你割的毛細管平整。

 

5、質(zhì)譜的基線其實跟液相的紫外檢測器和熒光檢測器一樣，基線高的原因不外乎內(nèi)部和外部的原因。

1）你選擇的流動相在質(zhì)譜的響應(yīng)比較高，比如水相比較多的時候，噪音比較大些；還有如果鹽含量比較大的時候，噪音更大些。
2）檢測器的靈敏度越高的時候，噪音應(yīng)該越高。如果質(zhì)譜的污染比較嚴重時，基線肯定比較高。比如離子阱檢測器，用得久了，阱中的離子就會增多，一方面降低了質(zhì)譜的靈敏度，另一方面增加了基線噪音。
3）質(zhì)譜的基線很多時候還跟你選擇的離子寬度有關(guān)。比如你作選擇離子掃描的時候，基線就低些。你作選擇反應(yīng)掃描的時候，離子寬度不要選得太寬，太寬噪音就高些。
4）多級質(zhì)譜一般做二級或三級質(zhì)譜，基線噪音就低很多。

 

6、質(zhì)譜維護經(jīng)驗交流：做樣前－檢查氮氣，流動相，質(zhì)譜儀的真空度，毛細管溫度…
1）最好不用直接進樣（容易污染離子源）；
2）做聯(lián)用時最好分流（a可以使用常規(guī)柱，b縮短分析時間，c 延長質(zhì)量分析器壽命）；
3）最好使用在線切換閥，降前每個樣品的前后1－2分鐘的流動相切入廢液（避免樣品中的鹽進入質(zhì)譜，做Sequence時可以把平衡柱子的流動相切入廢液）；
4）開始聯(lián)用前，直接運行質(zhì)譜數(shù)分鐘，可以先將溫度（毛細管溫度和離子源溫度（APCI））加熱到預(yù)設(shè)定值（如果是APCI源還可以避免將燒掉heater，太貴了，最好別燒）；
5）待機時將切換閥置于waste，避免剛開液相時將流動相打入離子源；
6）關(guān)機前毛細管的溫度先降下來，穩(wěn)定一段時間后再關(guān)閉電源，避免風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動后毛細管外圍的熱量向里擴散，容易引起內(nèi)部線路及電子元器件老化加速；
7）每天清理毛細管口外部，擦洗干凈，每次停機時注意清洗Skimmer，用無塵擦拭紙，kimberly那種；
8）如果用的是鋼瓶而且天天做樣的話，將兩個鋼瓶并聯(lián)，當然，一月不做一次的話就算了；
9）做定量時注意離子源噴針的具體位置，否則標準曲線就不能用了；
10）不要不經(jīng)過柱子分離進行定量分析，結(jié)果不可靠（競爭性抑制目標分子離子化）；
11）如果是負離子檢測的話，可以相流動相中加入少量異丙醇；
12）不要使用不揮發(fā)性鹽，如果使用揮發(fā)性鹽，但濃度不要超過20mmol/l；
13）需要使用酸的情況下可以用甲酸，乙酸，三氟乙酸可以用，但能用甲酸或乙酸時就別用TFA；

 

7、理論上液質(zhì)聯(lián)用禁止使用任何不揮發(fā)性的緩沖鹽，如果需要盡量使用諸如乙酸氨等揮發(fā)性鹽，濃度不要超過20mmol/l.

對于不揮發(fā)性的緩沖鹽，如果你的儀器有吹掃捕集的話也可使用，但一定要小心。萬不得已也不要用，首先有不揮發(fā)鹽是得不到好的離子流的，其次鹽留在質(zhì)譜中很難除掉，除非停機清洗，不然一直會影響其他樣品的分析。

可以找質(zhì)譜友好的條件來做液質(zhì)聯(lián)機，例如色譜條件為20mM磷酸鹽的水/乙腈流動相，做液質(zhì)聯(lián)機的時候就可以用醋酸銨代替，然后用醋酸調(diào)節(jié)pH值與磷酸鹽的一致即可。

除了難揮發(fā)的鹽，三乙胺、表面活性劑、還有高濃度（>0.5%）的TFA，都對質(zhì)譜不好，液質(zhì)聯(lián)用的流動相中應(yīng)該避免。

 

 

經(jīng)驗總結(jié)二：（質(zhì)量定量分析經(jīng)驗）

 

1、要用目標離子的碎片定量，特征性強，排除干擾；

 

2、在定量分析的方法設(shè)置上，盡可能提高掃描速率，提高準確率和重復(fù)性（可以通過a減小掃描質(zhì)量數(shù)的范圍來提高目標峰的掃描次數(shù)，或 將一個樣品全部分析時間斷分成n個segments，對目標離子單獨設(shè)置掃描模式）；

 

3、一定要通過色譜柱分離后定量分析，避免競爭性離子的存在影響目標離子的離子化效率；如果目標分子未與競爭性分子完全分開，則在離子化過程中導(dǎo)致目標分子的離子化效率降低，導(dǎo)致樣品分子的定量結(jié)果偏低，當然標準濃度的樣品也要用相同的方法分析。

 

4、如果樣品都是純品的話可以不經(jīng)過色譜柱直接進樣分析，包括做標準曲線的樣品（雖然不建議直接進樣分析）。

 

5、如果用的離子源的噴針位置是可移的話，一定要記住做標準曲線時其位置，否則其位置移動后在相同的條件下進入質(zhì)譜的離子流量會發(fā)生改變，標準曲線就不能使用了！對于調(diào)用的質(zhì)譜方法不要改動shealth gas and aux gas 的流速，否則會影響進入質(zhì)譜的樣品量。

 

6、所建立的標準曲線一個月后如果想重復(fù)使用，則用QC樣品檢驗一下該標準曲線！

 

7、對于已經(jīng)建立好的分析方法在掃描范圍、流動相的組成、梯度或流速等方面不要作任何改動，否則，標準曲線要重作。掃描范圍改變目標峰的掃描次數(shù)、流動相組成改變離子化效率，流速改變色譜峰的保留時間和峰寬。

 

8、離子阱的強項在于多級－定性，四級桿的強項在于定量；

 

9、對于熱穩(wěn)定性不好的樣品可以通過提高氣速，降低毛細管溫度的方法保證定量分析的重復(fù)性；一旦方法固定后不要輕易改動。

 

 

經(jīng)驗總結(jié)三：解析圖譜

 

 

解析未知樣的質(zhì)譜圖，大致按以下程序進行。

（一）解析分子離子區(qū)

(1) 標出各峰的質(zhì)荷比數(shù)，尤其注意高質(zhì)荷比區(qū)的峰。

(2) 識別分子離子峰。首先在高質(zhì)荷比區(qū)假定分子離子峰，判斷該假定分子離子峰與相鄰碎片離子峰關(guān)系是否合理，然后判斷其是否符合氮律。若二者均相符，可認為是分子離子峰。

(3) 分析同位素峰簇的相對強度比及峰與峰間的Dm值，判斷化合物是否含有Cl、Br、S、Si等元素及F、P、I等無同位素的元素。

(4) 推導(dǎo)分子式，計算不飽和度。由高分辨質(zhì)譜儀測得的精確分子量或由同位素峰簇的相對強度計算分子式。若二者均難以實現(xiàn)時，則由分子離子峰丟失的碎片及主要碎片離子推導(dǎo)，或與其它方法配合。

(5) 由分子離子峰的相對強度了解分子結(jié)構(gòu)的信息。分子離子峰的相對強度由分子的結(jié)構(gòu)所決定，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性大，相對強度就大。對于分子量約200的化合物，若分子離子峰為基峰或強蜂，譜圖中碎片離子較少、表明該化合物是高穩(wěn)定性分子，可能為芳烴或稠環(huán)化合物。
例如：萘分子離子峰m／z 128為基峰，蒽醌分子離子峰m／z 208也是基峰。
分子離子峰弱或不出現(xiàn)，化合物可能為多支鏈烴類、醇類、酸類等。

（二）解析碎片離子

(1) 由特征離子峰及丟失的中性碎片了解可能的結(jié)構(gòu)信息。
若質(zhì)譜圖中出現(xiàn)系列CnH2n+1峰，則化合物可能含長鏈烷基。若出現(xiàn)或部分出現(xiàn)m／z 77，66，65，51，40，39等弱的碎片離子蜂，表明化合物含有苯基。若m／z 91或105為基峰或強峰，表明化合物含有芐基或苯甲?；?。若質(zhì)譜圖中基峰或強峰出現(xiàn)在質(zhì)荷比的中部，而其它碎片離子峰少，則化合物可能由兩部分結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定，其間由容易斷裂的弱鍵相連。

(2) 綜合分析以上得到的全部信息，結(jié)合分子式及不飽和度，提出化合物的可能結(jié)構(gòu)。

(3) 分析所推導(dǎo)的可能結(jié)構(gòu)的裂解機理，看其是否與質(zhì)譜圖相符，確定其結(jié)構(gòu)，并進一步解釋質(zhì)譜，或與標準譜圖比較，或與其它譜(1H NMR、13C NMR、IR)配合，確證結(jié)構(gòu)。